مراحل سنتز پپتید

2.0 گرم رزین Wang خالی را در یک لوله واکنش تمیز و خشک وزن کنید، 15 میلی لیتر DMF اضافه کنید، فعال سازی دمای اتاق حدود 30 دقیقه.

در دمای اتاق، حلال مرحله قبل را از طریق یک هسته شنی فیلتر کنید و 1 میلی مول 5 مولار اضافی C ابتدا اسید آمینه در انتها، 5 برابر مولی اضافی DMAP، 5 مولار اضافی DIC، DMF انجام دهید واکنش دمای اتاق حلال 3 ساعت. پس از تکمیل واکنش DMF Wash 4 تا 6 بار، 5 تا 6 بار در هر میلی لیتر استفاده کنید. سپس مقدار مناسبی از پیریدین و انیدرید استیک با نسبت حجمی 1:1 اضافه کنید و به مدت 30 دقیقه واکنش دهید. پس از تکمیل واکنش DMF Wash 4 تا 6 بار، 5 تا 6 بار در هر میلی لیتر استفاده کنید. (اثر: ریزنقاط فعال روی رزین خالی غیر فعال را مسدود کنید.)

حلال را از مرحله قبل با صافی ساکشن بردارید و 10 میلی لیتر 20 درصد پیپریدین DMF را اضافه کنید. محلول به رزین اضافه شده، N2 هم بزنید 10 دقیقه در نهایت محلول را صاف کرده و 10 میلی لیتر محلول DMF پیپریدین 20 درصد، N2 Blow را اضافه کنید و 5 دقیقه هم بزنید سپس این عمل را دو بار صاف کنید و محلول را تکرار کنید. DMF 4 بار شستشو، 2 بار با متانول، 5-6 بار در هر میلی لیتر شستشو شود.

مقدار کمی از رزین را خارج کنید، آن را سه بار با متانول بشویید، نین هیدرین، KCN، یک قطره محلول فنل اضافه کنید، 105 درجه تا 110 درجه حرارت دهی 5 دقیقه، آبی تیره شدن یک واکنش مثبت است، نشان می دهد که حذف کامل شده است و مرحله بعدی واکنش را می توان انجام داد. در صورت بی رنگ بودن به این معنی است که گروه محافظ به طور کامل حذف نشده است و نیاز به تکرار عملیات ضدحفاظی فوق می باشد.

وزن 3 برابر مولار مازاد C آمینو اسید دوم در انتها، 3 برابر مولر اضافی HBTU و 3 برابر مولر اضافی HOBT در لوله واکنش، مقدار مناسب DMF را اضافه کنید پس از حل شدن کامل محلول، 10 برابر مولی اضافی (خالص) DIEA، واکنش دمای اتاق 5-6 بار DMF 40 بار استفاده 40 بار، استفاده از 40 دقیقه و 40 بار اضافه کنید. میلی لیتر مقدار کمی از رزین استفاده کنید با معرف تشخیص نین هیدرین تست کنید و بی رنگ به نظر می رسد، سپس 10 میلی لیتر 20% محلول DMF حذف Fmoc پیپریدین را اضافه کنید، این کار را دو بار به مدت 10 دقیقه، 5 دقیقه انجام دهید، پس از استفاده از DMF، 4 بار شستشو، 2 بار با متانول، هر بار 5-6 بار در میلی لیتر بشویید. مقدار کمی از رزین را بردارید و از معرف تشخیص نین هیدرین برای تشخیص آن استفاده کنید. اگر تشخیص آبی است، می توانید به مرحله بعدی واکنش بروید.

در نهایت، از محلول برش اسید تری فلورواستیک (95% TFA:2% TIS:2% EDT:1% H2O) استفاده کنید. لیزات را تا حد امکان با نیتروژن خشک کنید، با اتر رسوب دهید، سانتریفیوژ کنید و سپس با اتر به مدت 3 ثانیه بشویید. ~ 5 بار، یک جامد سفید به دست آمد. پس از حل کردن آن در آب خالص، HPLC نمک زدایی و کریستال ها را تصفیه، خشک و رسوب کنید، مقدار کمی آنالیز MS بگیرید.